反相液相色谱 液相色谱法 高效液相色谱 亿鑫仪器供
食品中着色剂高效液相色谱仪(hplc)检测方案
1 仪器与试剂
1.1 仪器
梯度高效液相色谱仪，配紫外
色谱柱 c18 250mm×4.6mm×5μm
超声波水浴
分析天平（感量0.001g）
0.45μm水性滤膜
1.2 试剂
甲醇，色谱纯。
正己烷。
聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛
磷酸，色谱纯。
柠檬酸溶液：称取20克柠檬酸，加水至100ml，溶解混匀。
乙酸铵溶液（0.02mol/l）称取1.54克乙酸铵，加水至1000ml，溶解，经经0.45μm水性滤膜过滤。
无水乙醇-氨水-水（7+2+1）：量取无水乙醇70ml、氨水20ml、水10ml混匀。
合成着色剂标准液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100克，置于100ml容量瓶中，加ph=6水到刻度，配成水溶液。
2 测定原理
食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离。
3 试样溶液的制备
称取试样5.000g-10.000g(精确至0.0001g)，置于100ml烧杯中，加100ml水，用柠檬酸溶液调ph到6，加热至60度，将1克聚酰胺粉加少许水调成糊状，倒入试样溶液中，搅拌片刻，以g3垂融漏斗抽滤，用ph=4的水洗涤3-5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3-5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3-5次，每次5ml，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5ml。经0.45μm水性滤膜过滤，进高效液相色谱仪测定。
4 色谱条件
色谱柱：c18 250mm×4.6mm×5μm；
流动相：以20mmol乙酸铵为流动相a，以甲醇为流动相b，按下表规定经行梯度洗脱；
时间（分钟）
流动相a（%）
流动相b
0
80
20
5
65
35
15
15
85
17
2
98
22
2
98
22.1
80
20
30
80
20
流速：1.0ml/min；
温度：室温；
进样量：20μl；
检测波长：254nm。
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