立式高压灭菌器在使用前，要先将蒸汽管道内冷凝水排放干净，蒸汽源压力达到0.3-0.5mpa后，打开蒸汽阀门；自带蒸发器设备，检查灭菌用水是否准备就绪；打开与灭菌器连接的水源开关，检查水源压力是否达到0.15mpa以上。打开空气压缩机电源，待压力达到0.5mpa以上后，打开压缩空气阀门；打开设备动力电源和控制电源，待夹套压力达到0.235mpa时再运行程序；检查密封圈、前封板和门板有无杂物，用干净的棉布擦拭干净。
　　放入灭菌物品后，关闭密封门，开始进行灭菌。灭菌过程中，应密切观察设备的运行状况，如有异常，及时处理；灭菌结束后，待室内压力达到安全压力（标准大气压下：-10kpa～10kpa）时，方可打开门取出物品。
　　使用后应切断设备控制电源、动力电源和空气压缩机电源；关闭水源开关及压缩空气阀门。每日工作完毕，灭菌器内外及其操作间应保持清洁，应将灭菌室污物清洗干净；管路上的过滤器，应至少半年清理一次，以防杂质堵塞。
　　立式高压灭菌器使用时应注意以下事项：
　　待灭菌的物品放置不宜过紧。
　　灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖。
　　必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。
　　装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。
　　为了确保灭菌效果，应定期检查灭菌效果，常用的方法是将硫磺粉末（熔点为115℃）或安息香酸（熔点为120℃）置于试管内，然后进行灭菌试验。如上述物质熔化，则说明高压蒸气灭菌器内的温度已达要求，灭菌的效果是可靠的。也可将检测灭菌器效果的胶纸（其上有温度敏感指示剂）贴于待灭菌的物品外包装上，如胶纸上指示剂变色，亦说明灭菌效果是可靠的。
　　现在已有微电脑自控型灭菌器，只需放去冷气后，仪器即可自动恒压定时，时间一到则自动切断电源并鸣笛，使用起来很方便。

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